stable 電擊感受態細胞

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更新時間：2020-09-08

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細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
Rabbit Angiopoietin 2, ANG-2 Elisa Kit硫酸沙丁胺醇（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit angiotension Ⅱ, ANG-Ⅱ Elisa Kit硫酸普拉睪酮鈉（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit angiotension Ⅱ, ANG-Ⅱ Elisa Kit撲米酮（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit soluble Factor-related Apoptosis, sFAS/Apo-1 Elisa Kit葡萄糖酸鋅（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit soluble Factor-related Apoptosis, sFAS/Apo-1 Elisa Kit曲安西龍（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit 6-keto-prostaglandin F1a, 6-K-PGF1a Elisa Kit舒林酸（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit 6-keto-prostaglandin F1a, 6-K-PGF1a Elisa KitHSP990Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit Thromboxane B2, TX-B2 Elisa Kit鹽酸妥拉唑林（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit Thromboxane B2, TX-B2 Elisa Kit鹽酸硫利達嗪（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit Vascuolar cell adhesion molecule 1, VCAM-1 Elisa Kit鹽酸卡替洛爾（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit Vascuolar cell adhesion molecule 1, VCAM-1 Elisa Kit二甲磺酸阿米三嗪（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit Fibrinogen, Fbg Elisa Kit蘿巴新（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit Fibrinogen, Fbg Elisa Kit卡莫氟(標準品)Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit D-Dimer, D2D Elisa Kit尼可占替諾（煙酸占替諾）標準品Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit D-Dimer, D2D Elisa Kit表戈米辛O（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit soluble interleukin-1 receptor Ⅰ, IL-1sR Ⅰ Elisa Kit琥珀酸鈉（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T
stable 電擊感受態細胞MEGF5/Slit3  復合型表皮生長因子樣結構域蛋白5一抗    * 0.2ml Hematin

TRIM29/ATDC  共濟失調毛細血管擴張癥D相關蛋白一抗    * 0.2ml PEG 800

UBE2V1/UEV1A  泛素結合酶E2變異體1一抗    * 0.2ml Quinestrol

VHLH/Von Hippel Lindau  腦視網膜血管瘤G7蛋白一抗（逢希伯林道氏?。?   * 0.2ml Phosphodiesterase I from Crotalus adamanteus Venom

Cyclin B3  周期素B3一抗    * 0.2ml Propidium iodide

CCNDBP1/GCIP  周期素D結合蛋白1一抗    * 0.2ml Sodium dodecylbenzenesulfonate

AFF4  淋巴細胞相關AF4樣蛋白一抗    * 0.2ml Sodium silicate hydrate

Cyclin K/CCNK  周期素K一抗    * 0.2ml BluoGal
操作方法：
1. 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質?；蜻B接產物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13 h。
基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質及糖被構成的生物膜，即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸：即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉錄的載體。
4、作為蛋白質合成的機器—核糖體，毫無例外地存在于一切細胞內，核糖體，是蛋白質合成的機器，在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。
6、能進行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動性，包括細胞自身的運動和細胞內部的物質運動
細胞培養的優點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
產品僅用于科研采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。